秒速飞艇哪里 偏方 养生 草药 穴位 方剂 书籍 中药 视频

痤疮

秘方栏目: 内科 外科 妇科 男科 儿科 肠胃 泌尿 肝胆 肛肠 骨科 神经 呼吸 皮肤 肿瘤 美容 滋补 延寿 心脑 食疗 按摩 治方大全

秒速飞艇哪里:痤疮动物模型制备规范

中医中药秘方网 秒速飞艇哪里 www.7sn63.cn 发布时间:2018-02-11
痤疮动物模型制备规范(草案)

造模动物

现用于制备痤疮模型的动物有家兔、 大鼠、 豚鼠、 叙利亚 仓鼠和墨西哥无毛犬等, 常用的是家兔、 大鼠。 一般选用成年 动物, 雌雄各半或单一雄性。

造模方法

1. 兔耳局部切皮+化学物质刺激制备兔耳痤疮模型

1.1 原理 皮肤切开加外涂煤焦油, 外部刺激使局部皮肤 重角质形成细胞过度增生角化, 可模拟痤疮局部表现。

1.2 方法 成年家兔, 雌雄各半, 体质量2~2.5kg, 右耳内 侧耳管开口处2cm×2cm范围, 涂煤焦油稀释液(95%乙醇配 成的2%浓度煤焦油溶液)0.25~0.5mL, 每天1次(或50%的油 酸0.2~0.25mL, 每天1次) , 左耳不做任何处理作为对照。 连涂 14~28d, 可制备兔耳痤疮模型。 本模型持续不少于14d。

2. 兔耳局部化学物质刺激+皮内注射表皮葡萄球菌制备兔 耳微痤疮模型

2.1 原理 皮肤表面涂油酸使毛囊孔堵塞, 皮内注射表皮 葡萄球菌使感染, 最终使毛囊腔扩大, 形成微痤疮模型。

2.2 方法 成年家兔, 雄性, 体质量2~2.5kg, 右耳内侧耳管 开口处2cm×2cm范围, 均匀涂布50%油酸0.2mL, 每天1次, 于第 7~12天, 右耳每天皮内注射表皮葡萄球菌 (10 8 cfu/mL)30μL, 左耳不做任何处理作为对照, 连续14~28d, 可制备兔耳微痤疮 模型。 本模型持续不少于14d。

3. 皮内注射痤疮丙酸杆菌制备大鼠耳痤疮模型

3.1 原理 大鼠耳廓皮内注射痤疮丙酸杆菌造成局部感 染, 可模拟痤疮外部表现及炎性反应的发病过程。

3.2 方法 成年大鼠, 雌雄各半, 体质量180~220g, 右耳 廓皮内注射痤疮丙酸杆菌液(6×10 7 cfu/mL)50μL, 每天1次, 于注射痤疮丙酸杆菌液第3天, 每只大鼠再次腹腔注射痤疮丙 酸杆菌液(6×10 7 cfu/mL) 1mL, 每天1次, 连续7d; 左耳不做任 何处理作为对照, 可制备大鼠耳痤疮模型。 本模型持续不少于 14d。

4. 人角质细胞腹部皮内注射制备豚鼠痤疮模型

4.1 原理 角质是参与痤疮形成的物质之一, 给豚鼠腹部 皮内注射人的角质细胞, 皮肤产生炎性丘疹, 可作为痤疮的炎 性反应模型。

4.2 方法 成年豚鼠, 雌雄各半, 体质量230~270g, 从人足 胝处取得角质, 用无菌水加热使其均质化, 迅速干燥, 用无菌 的1.5mPa·s明胶溶液配制成0.5mg/0.1mL的浓度。 豚鼠腹部去 毛, 皮内注射0.1mL角质混悬剂, 每天1次, 连续7d, 可制备豚鼠 痤疮模型。 本模型持续不少于14d。

模型观测指标

1. 表观指标 痤疮动物模型的主要表观指标有: ①局部组 织是否增厚、 变硬、 出现脓肿; ②涂抹处有无红斑和水肿, 皮肤 粗糙或皮肤菲??; ③毛囊面积及皮脂腺直径是否变大。 表观指 标可量化积分或半量化分级。

痤疮动物模型制备成功后, 局部皮肤见丘疹、 脓疱; 局部 组织增厚、 变硬; 毛囊口有黑色角栓, 成黑头粉刺状; 可见开放 增大的毛囊口, 隆起呈丘疹, 出现脓肿, 毛囊面积及皮脂腺直 径变大。

表观指标在痤疮临床诊断中占有重要地位, 也应是痤疮模 型是否制备成功的核心指标, 权重系数0.6。

2. 病理指标 局部组织病理指标是判断痤疮模型是否制 备成功的依据之一。 痤疮动物模型制备成功后, 可见局部表皮 增厚, 出现角化过度, 棘细胞层肥厚; 毛囊皮脂腺增大明显, 可 见角化物质, 毛囊漏斗部充满角化物质并扩大成壶状; 真皮上 层毛细血管明显扩张, 有炎性细胞浸润等。 局部组织病理指标 是痤疮病理变化的直接反映及依据, 是直接相关指标, 权重系 数0.3。

3. 生化指标 部分痤疮动物模型制备成功后会有生化指 标的变化, 如雌二醇、 睾酮等与痤疮模型的成功与否密切相 关。 生化指标是模型发生、 发展、 康复过程的机体反映, 有一定 价值, 但特异性不高, 是间接相关指标, 权重系数0.1。

备注

本制备规范(草案)介绍的是与痤疮中西医临床病症特点 吻合度较高且应用较多的动物模型。 还有一些痤疮模型, 如墨 西哥无毛犬模型、 猪耳模型、 叙利亚仓鼠模型等, 因应用较少, 或与中西医临床病症特点吻合度较低, 故未纳入本制备规范 (草案) 。

起草说明

1. 造模动物 痤疮的发病机制与人差异较大, 主要是没有 痤疮丙酸杆菌的参与。 由于动物的毛囊皮脂腺解剖特点、 皮脂 成分和寄生菌群等与人差别较大, 现有痤疮动物模型仅能模 仿痤疮的某一些临床特点。 目前用于制备痤疮模型的动物有家 兔、 大鼠、 豚鼠、 墨西哥无毛犬、 叙利亚仓鼠等。 以家兔、 大鼠 为常用。

2. 饲养环境 动物饲养环境应符合GB 14925-2010实验 动物环境与设施、 《实验动物管理条例》 《实验动物国家标准》 《关于善待实验动物的指导性意见》 《中华人民共和国动物保 护法》等要求, 符合相应标准及等级动物饲养环境的要求 [1-2] 。 3. 造模原理及评价依据 关于痤疮的病因病机目前尚无 明确定论, 目前认为主要与皮脂腺过度分泌、 痤疮丙酸杆菌增 殖、 毛囊皮脂腺导管的角化异常等因素有关。 现有动物模型多 是模拟临床的某些表现 [3-7] 。 常用的有切开兔耳皮肤加外涂煤 焦油等刺激物, 可较好模拟痤疮外部表现; 大鼠耳廓皮内注射 丙酸杆菌模拟痤疮炎性反应的发病过程等。

现有痤疮动物模型是病理性模型, 主要体现的是西医临床 指标, 动物模型的评价也以西医标准为主, 中医标准为参考。 西 医标准依据的是2006年版中华医学会编著《临床诊疗指南-皮 肤病与性病分册》中 “痤疮” 的诊断标准: ①初起在毛囊口, 呈 现小米粒大小红色丘疹, 亦可演变为脓疱, 此后可形成硬结样 白头粉刺或黑头粉刺, 严重病例可形成硬结性囊肿; ②多发于 男女青春期之面部及胸背部, 常伴有皮脂溢出; ③多有饮食不 节, 过食肥甘厚味, 或感外邪等诱发; ④青春期过后, 多数可自 然减轻; ⑤妇女多伴有月经不调。

痤疮的中医标准依据的是国家中医药管理局发布的《中医 病证(皮肤科)诊断疗效标准》中粉刺的诊断标准: ①风热证, 主症: 黑头或白头粉刺居多, 伴红色丘疹; 次症: 颜面潮红, 皮 肤烘热或灼热, 鼻息气热, 可有摔痛。 舌边尖红, 苔薄黄, 脉浮 数或脉数; ②湿热证, 主症: 皮肤油腻, 以疼痛性丘疹和脓疱 为主。 次症: 间有结节, 或伴有口臭, 便秘, 尿赤, 舌质红, 苔黄 腻, 脉滑; ③血瘀或痰凝证, 主症: 皮损为结节及囊肿, 色黯, 反复发作, 容易形成瘢痕; 次症: 囊肿质较硬, 舌质暗, 有瘀点 或瘀斑, 脉浮者为血瘀; 囊肿质软圆滑、 腹胀便塘, 苔滑或腻, 脉滑者为痰凝; ④冲任失调证, 主症: 无论何种皮肤损害, 女性 患者, 月经前加重。 次症: 丘疹多发于口周或下颌, 或伴有月经 不调, 小腹胀痛, 脉弦。 具备以上主症及次症2项以上者, 可诊 断为该证候。

3.1 兔耳局部切皮+化学物质刺激制备兔耳痤疮模型 参 照文献[8-10]。

3.1.1 原理 切开兔耳皮肤加以外涂煤焦油 (或油酸) 刺激 物, 外部刺激使局部皮肤重角质形成细胞过度增生角化, 可较 好模拟痤疮外部表现。

3.1.2 与临床指标吻合情况: 符合西医指标①②③, 吻合 度≥70%。

3.1.3 注意事项: 应注意外涂煤焦油 (或油酸) 的量、 存留局 部的时间及刺激物的性质对造模的影响。 兔耳痤疮模型侧重于 痤疮模型角化异常的特点, 多用于角质溶解药物的筛选。

3.2 兔耳局部化学物质刺激+皮内注射表皮葡萄球菌制备 兔耳微痤疮模型

3.2.1 原理: 选用雄性家兔, 使其体内的雄性激素对皮脂腺 具有一定的刺激作用, 同时在其皮脂腺分泌旺盛的情况下, 其 表面涂油酸使其毛囊孔堵塞, 并皮内注射表皮葡萄球菌使其感 染, 最终使毛囊腔扩大, 形成微痤疮模型。

3.2.2 与临床指标吻合情况: 符合西医指标①②③, 吻合 度≥70%。

3.2.3 注意事项: 应注意油酸的量、 存留局部的时间及刺 激物的性质以及表皮葡萄球菌的活性和用量对造模的影响。 油酸也可以用煤焦油代替, 表皮葡萄球菌也可以用丙酸杆菌 代替。

3.3 皮内注射痤疮丙酸杆菌制备大鼠耳痤疮模型 参照文 献[11]。

3.3.1 原理: 大鼠耳廓皮内注射丙酸杆菌致局部感染, 模拟 痤疮炎性反应的发病过程。

3.3.2 与临床指标吻合情况: 符合西医指标①②③, 吻合 度≥70%。

3.2.3 注意事项: 应注意丙酸杆菌的活性及用量对模型的 影响。

3.4 人角质细胞腹部皮内注射制备豚鼠痤疮模型

3.4.1 原理: 角质是产生痤疮及粉刺物质中的一种, 能导致 吞噬及慢性炎性反应, 将人角质细胞皮内注射于豚鼠腹部, 可 产生炎性反应丘疹, 模拟痤疮炎症的发病过程。

3.4.2 与临床指标吻合情况: 符合西医指标①②③, 吻合 度≥70%。

3.4.3 注意事项:应注意人角质细胞的用量对模型的 影响。

4. 观测指标

4.1 表观指标 Ⅰ级指标(核心指标) : 表观指标变化是痤 疮最直接的判定标准, 是痤疮临床诊断的重要依据, 也应是痤 疮动物模型制备成功与否判定的核心指标。 临床上以外观变化 为诊断标准。 模型建立后局部组织增厚变硬, 毛囊口有黑色角 栓, 形成黑头粉刺, 并开放增大、 隆起呈丘疹、 出现脓疱, 伴有 红斑、 水肿, 及色素沉着等 [12-15] 。 痤疮动物模型主要表观指标 分类见表1。 根据表观指标的特点, 分别对表观指标进行半定 量积分, 更有利于模型的判断。 表观指标权重系数0.5。

4.2 病理指标 Ⅱ类指标(直接相关指标) : 痤疮动物模型 局部皮肤病理变化是模型成功与否的直接证据 [16-18] , 模型制备 成功后, 用3mm直径打孔器取造模处皮肤组织, 镜检可见局部表 皮增厚, 出现角化过度, 棘细胞层肥厚; 毛囊皮脂腺增大明显, 可见角化物质, 毛囊漏斗部充满角化物质并扩大成壶状等。

痤疮局部皮肤病理变化分级参考标准: “-” : 皮肤组织正 常, 组织结构完整; “+” : 毛囊轻度角化、 皮脂腺轻度增生或无 明显增生; “++” : 毛囊面积轻度扩大、 漏斗部可见中等量的角 化物质、 皮脂腺轻度增生; “+++” : 毛囊面积明显扩大、 内有大 量的角化物质、 皮脂腺直径明显增大。

病理学观察可以准确、 直接、 客观说明痤疮的具体情况, 权重系数0.3。

4.3 生化指标 Ⅲ类指标(间接相关指标) : 生化指标如雌 二醇、 睾酮等与痤疮模型的成功与否密切相关 [19-20] , 是模型发 生、 发展、 康复过程的机体反映, 有一定价值, 但特异性不高, 是间接相关指标。 权重系数0.2。

4.4 指标分类 将痤疮动物模型各类指标进行分类, 并确 定各级权重系数, 结果见表2。

表2 痤疮动物模型各类指标的分类及权重系数
级别
Ⅰ类指标 (核心指标)
Ⅱ类指标 (相关指标)
Ⅲ类指标 (相关指标)
指标 表观指标 病理指标 生化指标
权重系数 0.5 0.3 0.2

痤疮动物模型Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ类指标可参照文献[21]法, 均按整 体为1进行各自的量化积分, 同一类的指标如Ⅰ类指标是由黑头 粉刺、 皮脂腺直径、 丘疹、 脓胞、 红斑、 水肿、 色变等多项指标 组成的, 目前是按同一贡献度计算的; 如观察的表观指标有7 项, 积分时各项小指标均为1/7, 该指标最高分值为1/7。 如具体 每一类指标中有特殊重要的指标, 可参照指标分类时的权重, 再对同一类指标中的小指标进行不同的权重分类。 Ⅱ、 Ⅲ类指 标的计算同此。

每一类指标造模成功后的总积分, 乘以相应指标的权重, 将三级指标积分相加, 即痤疮动物模型制备成功时的总积分。 按上述方法计算, 兔耳局部切皮+化学物质刺激制备兔耳痤疮 模型总积分约为0.86, 兔耳局部化学物质刺激+皮内注射表皮 葡萄球菌制备兔耳微痤疮模型总积分约为0.9, 皮内注射痤疮 丙酸杆菌制备大鼠耳痤疮模型总积分约为0.78, 人角质细胞腹 部皮内注射制备豚鼠痤疮模型总积分约为0.78。 痤疮动物模型 制备成功率相对高, 每次造??赡芑岢鱿植煌淖芑?, 为保 证每次制备痤疮动物模型的基本一致, 建议总积分可以有20% 左右的偏差, 以此作为评价痤疮动物模型成功与否的标准。 所 得总积分>0.6, 可认为该模型制备成功。 本草案所采用的计算 方法及所得总积分可供参考, 研究者可根据不同制备模方法所 观测指标另行设定、 计算, 适当调整。

4.5 说明 本草案及起草说明中的权重系数提示的仅是该 类指标在痤疮模型制备及判定中的重要性, 不是绝对的。 研究 者可根据具体痤疮模型防治的实际, 适当进行调整。 表观指标、 病理指标所采用的分类方法, 可能因在不同的 痤疮模型中采用标准不一致, 分类也会有所差异; 所列生化指 标也可能未全面涵盖痤疮相关的所有指标。 上述标准及指标重 点是给研究者提示, 应根据各类指标对痤疮模型的贡献度不同 进行分类, 尽量将单纯的定性描述转变成可量化或半量化的指 标, 提高判定的可控性; 所列的具体分类、 指标等是供参考的, 可根据具体痤疮实验研究的特点, 增加、 减少, 或另行设定。 起草人: 苗明三, 付珍娜, 田硕。

来源:中华中医药杂志 作者:苗明三 付珍娜 田硕

猜你感兴趣

最新推荐

643| 526| 357| 167| 374| 277| 471| 780| 398| 480|